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      Annexin V實驗對照設置

      來源:Pricella  瀏覽量:  發布時間:2023-03-13 17:18:15


      Annexin V是常用的檢測細胞凋亡的方法,一般通過流式細胞儀來檢測。為保證實驗結果的準確性,方便后續數據分析,通常需要設置不同對照實驗組。

      樣本不帶自發熒光

      組別

      Annexin V

      核染料

      樣本類型

      空白對照

      -

      -

      不做任何處理的細胞

      生物學對照

      +

      +

      不做任何處理的細胞

      單陽對照1

      +

      -

      有明顯凋亡的細胞

      單陽對照2

      -

      +

      有明顯凋亡的細胞

      實驗組

      +

      +

      實驗組細胞

       

      樣本帶自發熒光

      組別

      Annexin V

      核染料

      樣本類型

      空白對照

      -

      -

      不做任何處理無自發熒光的細胞

      生物學對照

      +

      +

      不做任何處理的細胞

      單陽對照1

      +

      -

      無自發熒光有明顯凋亡的細胞

      單陽對照2

      -

      +

      無自發熒光有明顯凋亡的細胞

      單陽對照3

      -

      -

      帶自發熒光的細胞

      實驗組

      +

      +

      實驗組細胞


      空白對照:調節閾值和儀器電壓。

      生物學對照:排除實驗操作對實驗結果的影響,扣除熒光背景,同時還可以作為實驗組劃門的依據。

      單陽對照:調節補償,同時也可以輔助調節該通道的電壓,防止信號超出儀器接受范圍。

      注意事項:

      *單陽對照組細胞一定要用明顯有凋亡的細胞,因為調節補償需要有足夠的陽性信號

      *樣本帶自發熒光需要設置三管單陽對照,確保每一管都只有一種熒光

      實驗組:檢測實驗結果。

      Tips

      樣本為貼壁細胞:

      *細胞培養基中漂浮的細胞需要收集,與后續收集的貼壁細胞一起檢測

      *避免人為操作帶來的細胞損傷,如:胰酶消化時間要適宜,消化貼壁細胞時操作要輕柔等

      *盡量不使用含EDTA的胰酶,因為EDTA會影響Annexin VPS的結合。如果一定要用含EDTA的胰酶,終止消化后要將細胞洗滌干凈,盡量去除EDTA

      *細胞比較難消化時可以分批次進行消化,避免先消化下來的細胞被過度消化導致假陽性結果

       


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